My little Pony ocorre na terra de Equestria, povoada por póneis de várias espécies (incluindo variantes de Pegasus e Unicórnios), juntamente com outras criaturas sensíveis e não-sensíveis. O programa centra-se na personagem de Twilight Sparkle, um pónei unicórnio enviado pela sua mentora e governante de Equestria, a Princesa Celestia, para a cidade de Ponyville para estudar a magia da amizade.
